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如何选择分光光度计参比溶液,有技巧可寻

发表时间:2022-07-06      点击次数:945
  分光光度计是一款将成分复杂的光,分解为光谱线的科学仪器,采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光线透过测试的样品后,部分光线被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
  因为参比溶液对光会存在一定的吸收,所以在比色前通常要将这部分吸收扣除,才更接近被测组分对光的吸收值,这样才能通过校正曲线来算得被测组分的浓度。分光光度计在进行光度测量时,利用参比溶液来调节仪器的零点,可以消除由于吸收池壁及溶剂对入射光的反射和吸收带来的误差,并扣除干扰的影响。参比溶液可根据下列情况来选择。
  分光光度计参比溶液的选择
  1、溶剂
  试样组成简单,共存组分对测定波长的光无吸收。
  2、试剂
  显色剂或其它试剂对测定波长有吸收,按显色反应相同的条件,不加入试样的试剂。
  3、试液
  试样基体溶液在测定波长有吸收,显色剂自身无色,可按与显色反应相同的条件处理试样,只是不加入显色剂。
  4、平行操作参比
  用不含被测组分的试样,在相同的条件下与被测试样同时进行处理,得到平行操作参比溶液。
  如在进行某种药物浓度监测时,取正常人的血样与待测血药浓度的血样进行平行操作处理,前者得到的溶液即可作为平行操作参比溶液。
  注意事项
  1、当试剂及显色剂均无色时,可用蒸馏水作参比溶液。
  2、显色剂有颜色,可选择不加试样溶液的试剂空白作参比溶液。
  3、显色剂为无色,而被测试液中存在其它有色离子,可用不加显色剂的被测试液作为参比溶液。
  4、显色剂和试液均有颜色,可将一份试液加入适当掩蔽剂,将被测组分掩蔽起来,使之不再与显色剂作用,而显色剂及其它试剂均按试液测定方法加入,以此作为参比溶液,这样就可以消除显色剂和一些共存组分的干扰。
  5、改变加入试剂的顺序,使被测组分不发生显色反应,可以把此溶液作为参比溶液消除干扰。
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